1、首先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。

    2、放回灭菌桶，并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤，高压蒸汽灭菌器以免妨碍蒸汽流通而影响灭菌效果。三角烧瓶与试管口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。

    3、加盖，并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。

    4、用电炉或煤气加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气*排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。本实验用 1．05kg/cm2，121．3℃，20分钟灭菌。

    5、高压蒸汽灭菌器灭菌所需时间到后，切断电源或关闭煤气，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至0时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。如果压力未降到0时，打开排气阀，就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染。

    6、将取出的灭菌培养基放入 37℃温箱培养24小时，经检查若无杂菌生长，即可待用。

    高压蒸汽灭菌器的使用方法

    （1）在外层锅内加适量的水，使水面与三角搁架相平为宜，将需要灭菌的物品放入内层锅，盖好锅盖并对称地扭紧螺旋。

    （2）加热使锅内产生蒸气，当压力表指针达到0.5个大气帕时，高压蒸汽灭菌器打开排气阀，将冷空气排出，此时压力表指针下降，当指针下降至零时，即将排气阀关好。

    （3）继续加热，锅内蒸气增加，压力表指针又上升，当锅内压力增加到所需压力（121℃）时，将火力减小，按所灭菌物品的特点，使蒸气压力维持所需压力一定时间（15-20min），然后将灭菌器断电，让其自然冷后再慢慢打开排气阀以排除余气，然后才能开盖取物。