乳铁蛋白（lactoferrin， LF）是一种分子量约为 80 kDa的铁结合糖蛋白，具有铁调节[^[2]]、免疫调节[^[3]]、促进骨生长[^[4]]、保护消化系统健康[^[5]]等生理活性，是乳及乳制品中重要营养指标之一，常被用作营养强化剂添加在婴幼儿配方食品中。但部分婴幼儿会对乳蛋白过敏，需要食用含水解蛋白的婴配乳粉或特医乳粉。此类产品中的水解蛋白和多肽会干扰乳铁蛋白检测，导致国标方法回收率不达标。

    行业反馈后，国家食品安全风险评估中心已明确现行的GB 5009.299-2024不适用于含有水解蛋白的婴幼儿配方食品（其中包括特殊医学用途婴儿配方食品）[1]。

针对此问题，岛津SGLC在国标基础上开发了专用缓冲盐提取包，适用于乳蛋白部分水解、深度水解及氨基酸配方等特医婴儿配方乳粉，配合SHIMSEN肝素亲和柱，可保证良好的回收率与重现性。相关方案如下：

一：样品前处理

采用专用提取盐包(适用于水解婴配粉，P/N：380-00930-10) + SHIMSEN 肝素亲和柱(3mg/3mL, PN: 380-00930-02)进行样品处理，实验操作和缓冲盐配置请按照完整版应用案例进行，步骤如下：

①专用提取液配制方法：提取缓冲盐瓶内加入375ml水，溶解，加入8g体积分数为10%吐温-20溶液，混匀，用磷酸调pH至6±0.2，用水定容至500ml；

②专用提取液的温度不能超过50℃，否则乳铁蛋白有失活的风险，致使回收率偏低，本实验采用48℃水浴；

③离心完成后，立即移取10mL上清液到15mL离心管中备用，否则上层乳脂会逐渐再溶解到水溶液中，干扰后续的上柱以及上机分析；

④SHIMSEN 肝素亲和柱包装盒内自带磷酸盐缓冲盐包Ⅰ和Ⅱ，使用前按要求溶解定容后即可用于活化；

⑤小柱及待净化液在上样前要恢复到室温；过柱时建议控制流速，每秒1-2滴(批量过柱时可采用自重流出)，流速过快会导致回收率偏低；

⑥优先建议离心后直接上机分析，不通过针头滤器，避免吸附损失；

⑦乳铁蛋白容易被玻璃小瓶吸附，建议使用PP材质的低吸附小瓶(PN：380-00511)。

话题二：上机分析

2.1 分析条件

仪器：Shimadzu LC-20AD 高效液相色谱仪